单一微挤压一次性3D打印皮肤组织方法的初步研究

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的 探索单一微挤压一次性3D打印皮肤组织方法的可行性。方法 从人皮肤真皮层分离、培养成纤维细胞并通过免疫荧光染色鉴定。以成纤维细胞和HaCaT细胞为种子细胞,用明胶、透明质酸和纤维蛋白原组成支架材料,通过微挤压法打印真皮层和表皮层,凝血酶交联支架材料。通过HE染色和免疫荧光染色观察3D打印皮肤组织的细胞分布。用活/死细胞染色试剂盒检测3D打印皮肤组织内细胞的活性。采用甲苯胺蓝渗透试验检测打印皮肤组织的屏障功能。结果 分离培养的成纤维细胞波形蛋白阳性细胞占98%以上。当支架材料中纤维蛋白原浓度在真皮层和表皮层分别为5 mg/ml和1 mg/ml,成纤维细胞(4×106个/ml)打印8层,HaCaT细胞(5×106个/ml)打印1层时,制备的3D打印皮肤组织气液培养7 d后,HE染色和免疫荧光检测显示表皮层和真皮层分层良好,表皮层厚度为(63.5±3.5)μm。3D打印皮肤组织浸没培养2 d和气液培养7 d,细胞活性分别为(90.2±0.9)%和(95.3±0.8)%。3D打印组织皮肤气液培养7 d后和正常皮肤具有类似的屏障功能。结论 我们建立了单一微挤压一次性3D打印皮肤组织的方法,成功制备了结构、表皮层厚度和屏障功能类似于正常人皮肤组织的组织工程皮肤,有可能成为未来批量生产组织工程皮肤的有效方法。

【关键词】 皮肤 成纤维细胞 HaCaT细胞 微挤压打印 组织结构

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